کلون کردن cdnaیneurotrophic factor)gdnf(glial cell line-derived در حامل بیانی با قابلیت الحاق هدفمند در ژنوم سلول میزبان

چ فده قیقحت : هدننک دک یلاوت زا یپک ود یاراد ینایب روتکو تخاس هعلاطم نیا زا فده gdnf نایب یارب یناسنا .تسا نارادناتسپ یلولس هدر رد : قیقحت شور cds نیئتورپ gdnf صخشم یکیتامروفناویب تاعلاطم هلیسو هب یناسنا دیدرگ تفج ود کمک اب . اب هک یرمیارپ رازفا مرن oligo7.4 یحارط دندش رد هناشن دیتپپ ، n و نیئتورپ لانیمرت his-tag رد c نآ لانیمرت شور زا هدافتسا اب .تفرگ رارق t/a cloning روتکو رد هدش دیلوت هعطق ptz57r/t رارق تفرگ تحص دییات زا دعب . یلاوت 2 نیا رد هدش نولک هعطق هناگادج روط هب هعطق ره ،روتکو زا دعب و دش هداد شرب بسانم یاه میزنآ اب زا یکی رد یزاس صلاخ multiple cloning site روتکو رد اه pbudce4.1/attb رارق تفرگ روتکو . pbudce4.1/attb هزادنا اب kb 6 . 4 نامزمه نایب یارب 2 نیا رد .تسا هدش یحارط نارادناتسپ یلولس هدر رد نژ روتکو 2 رتومورپ cmv و ef1? هیبعت هدیدرگ نژ ود نیا مه زا لقتسم و یمئاد ،?اب نایب هدننک نیمضت هک ،تسا یلاوت دوجو نینچمه .دشاب یم attb زارگتنیا رثا هاگیاج هک phic31 دورو ثعاب دناوت یم ،تسا هب رظن دروم تاعطق .دوش مونژ ناونع تحت یرگید روتکو طسوت زارگتنیا نیا دیلوت pcmv-int روتکو دعب هلحرم رد .دریگ یم تروص یاه لولس رد هدمآ تسد هب top10 e. coli هلیسو هب تبثم یاه ینلک یزاسادج زا دعب .دش مروفسنارت colony pcr هب .دیدرگ صلاخ و یزاسادج بیکرتون روتکو یلولس هدر ،هدش هتخاس روتکو ییاراک یسررب روظنم hek293t روتکو و روکذم بیکرتون روتکو طسوت نامزمه روط هب pcmv-int نیماتکفوپیل هلیسو هب ltx .دش تکفسنارت : جیاتن هدننک دک یلاوت زا یپک ود یاراد ینایب روتکو gdnf یلاوت هلیسو هب نآ تحص و ،هتخاس تیقفوم اب یناسنا یاه لولس .دش دییات یمیزنآ شرب و یبای hek293t یتنآ اب رامیت تحت ،هدش رکذ روتکو ود اب هدش تکفسنارت .دندش هداد شرتسگ و یزاسادج مواقم یاه ینلک و دنتفرگ رارق نیسوئز کیتویب : یدیلک ناگژاو rhgdnf ، hek293t cell line ، bicistronic vector زارگتنیا ، phic31